中文摘要
高等动物对环境的感知和适应集中在机体特化的解剖结构,下丘脑依靠温度敏感神经元参与这种对环境温度信息的感受整合,进而维持内环境的稳态,应用电生理学(脑片双膜片钳)、分子生物学(单细胞RT-PCR、RNAi)、免疫组织化学等方法,以初级(pWSN)和次级温敏神经元(sWSN)为研究对象,结合离子通道在两种类型神经元细胞和亚细胞(树突)的mRNA丰度和蛋白定位,以及利用脑片覆盖技术观察神经元发育过程中离子通道活动的变化及调制对神经元温度敏感性的影响,研究短暂感受器电位(TRP)和超极化激活的环化核苷酸调控的离子通道(HCN)在感受和调控温度变化时与神经元放电率和PSP整合机制的关系,以评价TRP和HCN两种非选择性离子通道在神经元树突-胞体在温度信息接收和传导过程中的功能,从分子水平阐明调定点形成的离子通道机制,同时为中枢神经元参与机体内环境稳态的研究提供思路和理论依据。
结题摘要
根据项目的安排,实验中发现TRPV通道和TRPC通道在神经元的温度敏感性中起着非常重要的作用,这种作用与温度诱导的胞内Ca2+的变化关系密切。实验发现神经元的温度敏感性主要与动作电位间期(ISI)的变化有关,而ISI与HCN介导的Ih电流关系密切。通过采用Ih电流的阻断剂ZD7288对Ih电流进行抑制,发现神经元的放电发生了非常明显的变化,但这种变化与神经元胞体-突起表达的HCN亚型无关,采用单细胞RT-PCR技术显示神经元胞体-突起主要表达HCN1~3亚型,缺少HCN4型的表达,进一步采用突起电生理记录技术结合免疫组化技术在发育标本上发现HCN1~4呈现为不均匀的分布,这种极性分布可能是造成神经元温度敏感性发生变化的关键原因。
