中文摘要
本项目旨在对中国对虾急性时相反应期的血淋巴蛋白质组的变化进行研究,利用病原体相关分子模式对中国对虾进行免疫刺激以模拟急性时相反应的状态;然后使用双向电泳对天然的和免疫刺激后的血淋巴蛋白质表达谱的变化进行分析筛选并确定差异表达的蛋白质点;利用蛋白质鉴定技术对上述蛋白进行鉴定并分析其功能。以探索中国对虾在受到病原体攻击后在第一时间内从体内贮藏位点分泌释放到血淋巴中的急性时相蛋白,即所谓的分泌蛋白质组(secretome)。这对阐明中国对虾的早期免疫防御反应机制具有重要意义,为海洋无脊椎动物的免疫学研究提供新的思路,该研究能够引导我们对天然免疫进行全面的认识。
结题摘要
本项目主要是利用蛋白质组学新技术探索中国对虾在受到病原体攻击后在第一时间内从体内贮藏位点分泌释放到血淋巴中的急性时相蛋白。1. 对中国对虾血淋巴中的几种主要的高丰度蛋白进行了研究,包括高丰度蛋白基因cDNA的分子克隆以及蛋白的分离纯化鉴定,分析了中国对虾高丰度蛋白的性质以及在血淋巴中的组成与存在形式,为后续蛋白质组学中蛋白样品制备奠定基础;2. 对双向电泳的程序及有关环节进行了一系列改进和优化,建立起一套适合对虾血浆蛋白组分析的双向电泳技术。应用超速离心等方法建立了中国对虾血浆高丰度蛋白的去除技术,为甲壳动物血淋巴蛋白质组研究提供了可靠的技术手段;3. 运用2-DE差异蛋白质组学的方法分析了LPS免疫刺激后中国对虾血淋巴中蛋白质表达水平的变化;4. 建立了液体芯片飞行时间质谱技术对中国对虾血清蛋白质组学分析的研究方法,并对注射LPS诱导的急性时相反应的血清多肽谱的变化进行了质谱分析,筛选出显著差异表达蛋白峰13个。项目的完成为海洋无脊椎动物的免疫学研究提供了新的技术手段,对阐明中国对虾的早期免疫防御反应机制具有重要意义。
