三苯氧胺（他莫昔芬tamoxifen，TAM）在乳腺癌内分泌治疗中占据着重要地位，但是长期应用TAM的继发性耐药限制了其临床应用。项目基于乳腺癌TAM耐药机制的研究现状，结合先期有关新型雌激素受体GPER1在乳腺癌中作用的研究，提出TAM对GPER1的激活可能是TAM继发耐药的始动因素这一假设。通过建立体外TAM耐药细胞研究平台，首先分析TAM对GPER1信号通路的启动机制，并通过siRNA干扰以及小分子GPER1激动剂等手段干预GPER1信号途径，进一步分析其下游EGFR信号途径的变化，以及对应乳腺癌细胞生物学行为的改变，包括细胞生长、克隆、凋亡、迁徙能力的改变等，即以阐明GPER1的激活是维系TAM耐药的始动因素。研究结果将有助于更精确地掌握TAM产生耐药的机制，寻找内分泌治疗的新靶点，拓展乳腺癌的内分泌治疗领域。

项目按计划顺利完成各年度研究任务，取得如下进展：1.完成临床样本回顾性研究，发现雌激素G蛋白偶联受体（GPER1）是乳腺癌患者的不良预后因子，在继发他莫昔芬（TAM）耐药的癌组织中表达上调，且与EGFR的表达显著相关。2. 应用短时间高浓度OHT冲击法成功建立乳腺癌MCF-7 TAM耐药（MCF-7R）细胞模型。3.应用上述细胞模型，研究发现GPER1介导的促增殖和抗凋亡效应在MCF-7细胞继发TAM耐药后增强；GPER1介导的表皮生长因子受体（EGFR）信号通路在MCF-7R细胞中活化；MCF-7R细胞中GPER1通过向细胞膜转移从而增强其与EGFR间的相互作用；GPER1在MCF-7R细胞中介导产生的cAMP水平降低；体内外研究证实GPER1的拮抗剂G15能够恢复MCF-7R细胞对TAM的敏感性；上述结果提示TAM长期刺激可使GPER1向细胞膜转位，导致GPER1-EGFR偶联信号异常活化；同时减弱cAMP对EGFR信号下游元件的阻滞效应，最终导致癌细胞TAM耐受。4.证实TAM通过GPER1-EGFR-PI3K信号通路激活Rac1、RhoA激酶引起肌动蛋白细胞骨架重构从而促进MCF-7R细胞的迁移，可能是GPER1参与诱导乳腺癌TAM耐受的重要机制。5．通过基因芯片及生物信息学分析发现GPER在MCF7R细胞中上调integrinβ1等86种基因表达，可能激活下游细胞骨架调节及上皮间质转化等多条信号通路，进而促进TAM耐受，提示GPER1可能通过多种机制诱导TAM耐受。研究结果证实GPER1在乳腺癌TAM耐受中的重要作用，可能成为逆转或延缓乳腺癌TAM耐药的一个潜在治疗靶点。项目发表论文6篇，其中1篇SCI已被《Breast Cancer Research》（IF：5.82 ）接受；培养研究生6名。