中文摘要
黄瓜花叶病毒(CMV)是目前世界上发生最普遍、危害最严重的植物病毒。该病毒具有(+)ssRNA三分体基因组,卫星RNA对CMV引起的寄主症状往往具有减弱作用,但我们也发现有些卫星RNA对CMV的致病性没有明显影响;本项目拟建立并优化荧光定量RT-PCR实验体系,以CMV及其卫星RNA为研究材料,通过分析致弱/非致弱卫星共侵染对CMV基因组各区段复制、移动和积累的影响,以及抗病/感病寄主中CMV各基因表达的量化变化,并结合寄主反应差异,归纳出CMV致病性与其基因表达量之间的变化规律以及受卫星RNA影响的分子机制。本项目的实施将首次勾画三分体病毒在寄主体内各基因组RNA表达的时序变化,探索病毒的复制模型和致病机理,为选择性阻断病毒复制和抗病毒作物育种提供新的理论依据。
结题摘要
黄瓜花叶病毒(CMV)具有(+)ssRNA三分体基因组,卫星RNA通常会改变CMV引起的寄主症状;本项目以CMV-Fny,CMV-Fny?2b,CMV-Fny-satYn12和CMV-Fny-satT1为研究对象,利用荧光定量RT-PCR实验体系,分析了2b基因缺失、致弱/非致弱卫星共侵染对CMV基因组各区段复制、移动和积累的影响。此外,首创了植物miRNAs的Stem-loop Real-time RT-PCR检测方法,比较了不同病毒侵染后寄主根、茎、叶、花、果实中miRNAs及其靶标mRNAs表达谱的变化。根据得到的实验结果,并结合寄主植物不同组织的症状表现,我们认为寄主症状的严重程度与CMV的积累量之间无直接相关性,卫星RNA并非通过影响辅助病毒基因组的表达量来改变寄主症状。病毒感染会干扰寄主miRNA调控途径,引起特定mRNA表达量发生变化,产生相应寄主症状。在此过程中CMV的致病决定因子(2b基因)起着非常重要的作用,推测卫星RNA通过影响寄主miRNA调控途径来改变寄主症状。该结果为探讨病毒的致病机理提供新的着眼点,为研究卫星RNA影响辅助病毒的分子机制提供了新的理论依据。
