Prokinecticn 2（PK2）是新发现的神经多肽,与其受体PKR2分布于下丘脑的视交叉上核及其投射位点，对神经系统的近日节律功能可能十分重要，然而其作用机制还未被深入研究。本项目将以金黄地鼠为动物模型，通过对基因表达的脑内定点RNA干扰，研究视交叉上核表达的PK2和PKR2基因在近日节律功能中的作用及神经生物学基础：.在金黄地鼠中克隆PK2和PKR2基因，对其在视交叉上核的表达进行脑片的原位杂交定位和定量分析；制备针对PK2的抗体，用免疫组化和原位杂交方法视交叉上核内PK2与VIP和AVP等多肽的分布关系及PK2蛋白表达的昼夜变化；制备并筛选针对PK2和PKR2的有效RNA干扰构建体，将其包装入腺相关病毒（AAV）载体；在视交叉上核区定点注射实现RNAi，通过ClockLab和VitalView系统记录动物的行为与生理活动，分析视交叉上核表达的PK2和PKR2在近日节律中的作用。

Prokinecticn 2（PK2）是新近发现的神经性多肽,与其受体PKR2分别分布于视交叉上核和视交叉上核神经元的投射位点中，但其对中枢生物钟功能的作用尚未被深入阐释。金黄地鼠是昼夜节律研究领域的一个重要模式动物。我们已同源克隆出金黄地鼠的PK2和PKR2基因；初步分析了其在视交叉上核（SCN）内表达的昼夜变化。目前我们已经获得了针对PK2的良好抗体，初步对PK2-ir纤维在脑内的投射分布及其昼夜变化进行了分析，在对Colchicine处理的脑片上SCN内PK2和AVP及VIP等多肽的共定位分布关系进行分析，并拟结合SCN的电损毁实验，明确源于SCN的PK2纤维在脑内的投射分布和昼夜变化。正在对PKR2在SCN内与VIP和AVP等神经元的相互关系进行分析。已设计针对PKR2的RNAi有效序列，在本元正阳公司制备相关AAV病毒载体，拟在近期开展SCN内RNAi的定位注射和行为学实验。项目已有一篇Brain Res的论文发表，另外两篇论文的工作正在进行中，将在2011年内完成并投稿。本项目采用了新颖的技术手段，所取得的结果将有助于深入理解昼夜节律产生的神经生物学基础。