中文摘要
本项目针对大豆食心虫给大豆生产造成的巨大经济损失,以大豆和大豆食心虫为研究对象,利用表达食心虫生长关键基因dsRNA的转基因大豆介导大豆食心虫发生RNA干扰,抑制大豆食心虫相应基因的表达,阻断大豆食心虫正常发育,达到防治大豆食心虫的目的,实现传统育种与RNA干扰的整合,建立一种高效、特异、安全的抗大豆食心虫育种新方法,为提高大豆产量和品质奠定理论依据。
结题摘要
本研究对大豆食心虫室内饲养体系的环境条件、饲料成分和养虫设备在前人研究基础上进行了优化,建立了成熟的室内饲养体系。首次克隆了大豆食心虫蛋白质合成重要的18SrDNA、28SrDNA、P0基因和水解酶Ser基因。将体外转录的18SrDNA、28SrDNA、P0、Ser基因的dsRNA片段利用显微注射技术分别注入大豆食心虫二龄幼虫体内,观察大豆食心虫体内相应靶基因的表达情况,选取致死率较高的18SrDNA、P0 和Ser基因片段作为靶基因片段构建植物表达载体,用于转化大豆的研究。利用Gateway技术构建靶基因片段的RNAi植物表达载体,利用农杆菌介导大豆子叶节法导入大豆抗虫品系2004-81中,获得转基因新种质8份。经室内和田间抗虫试验,筛选出转P0基因的T2代抗虫品系2个,转18SrDNA基因的T3代抗虫品系1个和高抗品系1个。为进一步探明转基因大豆抗虫机理,利用qPCR技术对取食转基因大豆豆荚的大豆食心虫二龄幼虫体内靶基因表达情况进行分析,转基因大豆表达的dsRNA经过取食进入大豆食心虫体内后可明显抑制幼虫体内目的基因表达,使大豆食心虫滞育或死亡,达到明显抗虫效果。
